1. Klasifikacija
Gel elektroforeza se dijeli na vertikalne tipove (uključujući stupčaste gelove i pločaste gelove) i horizontalne tipove (uglavnom pločaste gelove) (Slika 6-18). Općenito, vertikalno odvajanje malo je bolje od horizontalnog, ali horizontalna priprema gela ima najmanje četiri prednosti: postoji potpora ispod cijelog gela, što omogućuje upotrebu agaroze niske koncentracije; moguće je pripremiti ploče agaroznog gela različitih specifikacija; priprema gela i punjenje uzorka su praktičniji; komora za elektroforezu je jednostavna za konstruirati i isplativa. Budući da se horizontalna elektroforeza izvodi s pločom agaroznog gela potpuno uronjenom oko 1 mm ispod površine pufera za elektroforezu, naziva se i uronjena elektroforeza.
Spremnik za elektroforezu DYCP-31DN za elektroforezu u agaroznom gelu
2. Sustav međuspremnika
U odvajanju nukleinskih kiselina većina sustava usvaja kontinuirane sustave. Uobičajeno korišteni puferi za elektroforezu uključuju TBE (0,08mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L borne kiseline, 0,0024mol/L EDTA) pufer i THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/L natrijev acetat, 0,0018 mol/L EDTA) pufer. Ovi se puferi općenito pripremaju kao 10x temeljne otopine i razrjeđuju do potrebne koncentracije kada se koriste. Brzine migracije linearne i kružne DNA u agaroznom gelu variraju ovisno o korištenom puferu. U THE puferu, brzina migracije linearne DNA veća je od one kružne DNA, dok je u TBE puferu obrnuto.
3. Priprema agaroznog gela
(1) Priprema vodoravnog agaroznog gela
(a) Pripremite potrebnu koncentraciju agaroznog gela koristeći 1x pufer za elektroforezu.
(b) Zagrijte agarozu do potpunog otapanja u kipućoj vodenoj kupelji, na magnetskoj miješalici ili u mikrovalnoj pećnici. Ohladite otopinu agaroze na 55°C i dodajte boju etidijev bromid (EB) do konačne koncentracije od 0,5 μg/ml.
(c) Zatvorite rubove staklenih ili akrilnih ploča s malom količinom agaroznog gela, dodajte češalj i postavite zupce češlja oko 0,5~1,0 mm iznad ploče.
(d) Otopljenu otopinu agaroznog gela kontinuirano ulijevajte u kalup od stakla ili akrilne ploče (debljina ovisi o volumenu uzorka DNK), izbjegavajući uvođenje mjehurića zraka. Pustite da se prirodno skrutne na sobnoj temperaturi.
(e) Pažljivo uklonite češalj nakon potpunog skrućivanja. Dodajte odgovarajuću količinu pufera za elektroforezu u spremnik za gel, pazeći da je ploča s gelom uronjena oko 1 mm ispod površine pufera za elektroforezu.
(2) Priprema vertikalnog agaroznog gela
(a) Uklonite masnoću ili ostatke sa staklenih ploča ispiranjem etanolom.
(b) Postavite razmakne ploče između prednjih i stražnjih pregrada, poravnajte rubove razmaknih ploča s prednjim i stražnjim pregradama i pričvrstite ih stezaljkama.
(c) Dodajte 2% agaroze u 1x puferu između rubova razmaknih ploča kako biste formirali 1 cm visok agarozni čep na dnu komore za lijevanje gela.
(d) Ulijte otopljeni agarozni gel u željenoj koncentraciji, pripremljen u 1x puferu, u komoru za gel do 1 cm ispod vrha.
(e) Umetnite češalj, izbjegavajući zadržavanje mjehurića zraka ispod zubaca češlja. Ponekad se mogu pojaviti bore na zubima češlja tijekom hlađenja agaroznog gela; u takvim slučajevima jednostavno dodajte malo otopljene agaroze na vrh da se učvrsti.
(f) Uklonite češalj. Kako biste spriječili curenje pufera u otvoru za punjenje, zatvorite spoj između ploče s agaroznim gelom i komore za elektroforezu s 2% agaroze i dodajte potrebnu količinu pufera.
(g) Dodajte 1x pufer za elektroforezu u komoru za gel.
(h) Pažljivo stavite uzorke DNK na agarozni gel ispod pufera.
Više informacija o osnovnim znanjima o elektroforezi u agaroznom gelu podijelit ćemo sljedeći tjedan. Voljeli bismo da ove informacije budu od pomoći vašem eksperimentu.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) specijalizirana je za proizvodnju instrumenata za elektroforezu više od 50 godina s vlastitim profesionalnim tehničkim timom i centrom za istraživanje i razvoj. Imamo pouzdanu i cjelovitu proizvodnu liniju od projektiranja do pregleda, skladišta, kao i marketinšku podršku. Naši glavni proizvodi su ćelija za elektroforezu (spremnik/komora), napajanje za elektroforezu, plavi LED transiluminator, UV transiluminator, gel slika i sustav analize itd.
Sada tražimo partnere, dobrodošli su i OEM spremnici za elektroforezu i distributeri.
Ako imate bilo kakav plan za kupnju naših proizvoda, slobodno nas kontaktirajte. Možete nam poslati poruku na email[e-mail zaštićen]ili[e-mail zaštićen], ili nas nazovite na +86 15810650221 ili dodajte Whatsapp +86 15810650221, ili Wechat: 15810650221.
Skenirajte QR kod za dodavanje na Whatsapp ili WeChat.
Vrijeme objave: 7. prosinca 2023