Načelo
Elektroforeza filmom celuloznog acetata je metoda elektroforeze koja koristi film celuloznog acetata kao potporu. Pojava u kojoj se nabijene čestice pod djelovanjem električnog polja kreću prema suprotnoj elektrodi naziva se elektroforeza. Budući da svaki protein ima određenu izoelektričnu točku, ako se protein stavi u otopinu s pH nižim od njegove izoelektrične točke, protein će biti pozitivno nabijen i kretati se prema negativnoj elektrodi. Naprotiv, pomiče se na pozitivan pol. Budući da je brzina gibanja proteinskih molekula u električnom polju povezana s njihovim nabojem, oblikom i veličinom molekula, elektroforezom se mogu razdvojiti različiti proteini. Serum sadrži različite proteine, od kojih svi imaju izoelektrične točke na pH 7,5 ili manje. Kada se serum stavi u pufer pH 8,6 za pokretanje elektroforeze, svi proteini seruma su negativno nabijeni i pomaknut će se prema pozitivnoj strani u električnom polju. Budući da razni proteini u serumu imaju različite naboje pri istom pH, molekularne čestice su različite veličine, a time i brzina migracije, te se odvajaju elektroforezom. Izoelektrične točke i molekularne težine serumskih proteina prikazane su u tablici ispod:
| Protein | Izoelektrične točke (PI) | Molekularna težina |
| Albumin | 4.88 | 69 000 |
| α1-glulin | 5.00 | 200 000 |
| α2-glulin | 5.06 | 300 000 |
| β-glulin | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-gluin | 6,85 ~ 7,50 | 156 000 ~ 300 000 |
Eksperiment je odvajanje različitih proteina u krvnom serumu s celulozno acetatnom membranom (skraćeno CAM) kao potpornim medijem. CAM je vrsta pjenastog loosaefilm s dobrom ravnomjernošću, a debljina je 0,1 mm-1,5 mm, što ima određenu apsorpciju vode.
Materijali, instrumenti i reagensi za CAM elektroforezu
Uzorci:zdravi ljudski krvni serum
Instrument:napajanje DYY-6C, spremnik za elektroforezu DYCP-38C, superiorno punjenje uzorka WD-9404
Reagensi
1) membrana od celuloznog acetata 7X9cm
2) Puferska otopina barbitola PH 8,6 (ionska snaga 0,05-0,09, to je 0,06 tid vremena.): uzmite 1,84 g dietil barbiturne kiseline, a zatim uzmite 1,03 g dietil natrijevog pentobarbitala, dodajte malo destilirane vode da se zagrije da se otopi i kuhajte do 1000 ml;
3) Mrlja: Ponceau S 0,2 g, trikloroctena kiselina 3 g, dodati 100 ml destilirane vode;
4) TBS/T ili PBS/T: 45 ml 95% etanola, 5 ml ledene octene kiseline, dodajte 50 ml destilirane vode;
5) Otopina za čišćenje: 70 ml bezvodnog etanola, 30 ml ledene octene kiseline.
Eksperiment Method
1) Pripremite membranu: Uronite membranu u pufersku otopinu barbitola 30 min-8 h, izvadite je, uklonite višak otopine upijajućim papirom.
2) Stavljanje uzoraka: Razlikujte hrapavu i glatku stranu membrane i označite crtu na udaljenosti od 1,5 cm do gornjeg kraja na hrapavoj strani. Stavite uzorke vrhunskim alatom za umetanje uzoraka na hrapavu stranu. Napomena: Uzorke treba staviti na hrapavu stranu membrane. Nakon što su uzorci seruma potpuno prodrli u membranu, okrenite membranu, hrapavu stranu (s uzorcima) stavite prema dolje prema spremniku, a kraj s uzorcima postavite u negativnu elektrodu.
3) Elektroforeza: Uključite napajanje, 0,4～0,6m A/cm membrana, vrijeme rada je 30-45 min. Nakon elektroforeze isključite napajanje.
4) Zamrljajte i očistite: Izvadite membranu iz spremnika i uroniteit u otopinu boje na 5 minuta, a zatim ga čistite u otopini za čišćenje više puta 3-4 puta dok boja pozadine ne postane čista. Proteini u serumu trebali bi biti prikazani na trakama, a normalno postoji pet zona, od gornjeg kraja do označene linije, albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Očuvanje: stavite suhu elektroforezubendu otopini za čišćenje 10-15 minuta, a zatim ga izvadite i zalijepite na čisto staklo, nakon što se osuši, postat će proziran filmbend.
EksperimentProizlaziti
Učinak razdvajanja uzoraka seruma je dobar i nema fenomena trakastog repa. Ponovljivost rezultata varira ovisno o ispitnim postupcima i metodama eksperimentatora, a ponovljivost je visoka.
Zaključak
Sustav brze detekcije kliničke elektroforeze (Spremnik za elektroforezuDYCP-38C,napajanjeDYY-6C i superiorno punjenje uzorka WD-9404) koje proizvodi naštvrtka Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdispunjava eksperimentalne zahtjeve,irezultati su ponovljivi, jednostavni i brzi, pogodni zanastavaistraživanje.
Peking LiuyiBiotechnology Co., Ltd specijalizirana je za proizvodnju proizvoda za elektroforezu za industriju znanosti o životu, kojaima više od 50 godina povijesti u Kini i tvrtka može pružiti stabilne i visokokvalitetne proizvode diljem svijeta. Kroz godine razvoja, vrijedan je vašeg izbora!
Sada tražimo partnere, dobrodošli su i OEM spremnici za elektroforezu i distributeri.
Za više informacija o nama, kontaktirajte nas putem e-pošte[e-mail zaštićen]ili[e-mail zaštićen].
Vrijeme objave: 14. studenog 2022