Uvod
Gel elektroforeza temeljna je tehnika u molekularnoj biologiji koja se široko koristi za odvajanje proteina, nukleinskih kiselina i drugih makromolekula. Ispravna kontrola volumena uzorka, napona i vremena elektroforeze ključna je za postizanje točnih i ponovljivih rezultata.Naš kolega iz laboratorija nudinajbolje prakse za upravljanje ovim parametrima tijekom SDS-PAGE gel elektroforeze.
Beijing Liuyi Biotechnology proizvodi za gel elektroforezu
Volumen uzorka: osiguranje dosljednosti
Prilikom izvođenja SDS-PAGE elektroforeze, volumen uzorka je ključni čimbenik koji može značajno utjecati na rezoluciju vaših rezultata. Općenito se preporučuje unos 10 µL ukupnog proteina po jažici. Kako bi se osigurala dosljednost i spriječila difuzija uzorka između susjednih jažica, važno je napuniti jednaki volumen 1x pufera za punjenje u sve prazne jažice. Ova mjera opreza pomaže spriječiti širenje uzoraka u susjedne staze, što se može dogoditi ako se jažica ostavi prazna.
Prije punjenja uzoraka uvijek počnite dodavanjem markera molekularne težine u jednu jažicu. To omogućuje jednostavnu identifikaciju veličine proteina nakon elektroforeze.
Kontrola napona: balansiranje brzine i razlučivosti
Napon primijenjen tijekom elektroforeze izravno utječe i na brzinu kojom uzorci migriraju kroz gel i na rezoluciju odvajanja. Za SDS-PAGE, preporučljivo je započeti s niskim naponom od oko 80V. Ovaj početni niski napon omogućuje uzorcima polaganu i ravnomjernu migraciju, koncentrirajući ih u oštru traku dok ulaze u gel za razdvajanje.
Nakon što su uzorci potpuno ušli u gel za odvajanje, napon se može povećati na 120 V. Ovaj viši napon ubrzava migraciju, osiguravajući da se proteini učinkovito odvajaju prema njihovoj molekularnoj težini. Neophodno je pratiti napredovanje fronte bromfenol plave boje, što označava završetak elektroforeze. Za gelove s koncentracijom od 10-12%, obično je dovoljno 80-90 minuta; međutim, za 15% gelove, možda ćete morati malo produžiti vrijeme rada.
Upravljanje vremenom: znati kada stati
Vrijeme je još jedan kritični faktor u gel elektroforezi. Predugo ili prekratko djelovanje gela može dovesti do suboptimalnog odvajanja. Migracija bromofenol plave boje je koristan pokazatelj: kada dosegne dno gela, obično je vrijeme da se zaustavi. Za standardne gelove, kao što je 10-12%, elektroforeza u trajanju od oko 80-90 minuta obično je odgovarajuća. Za gelove s višim postotkom, poput 15%, vrijeme izvođenja treba produljiti kako bi se osiguralo potpuno odvajanje proteina.
Upravljanje međuspremnikom: Ponovna upotreba i priprema međuspremnika
Pufer za elektroforezu može se ponovno upotrijebiti 1-2 puta, ovisno o specifičnim uvjetima vašeg laboratorija. Međutim, za optimalne rezultate preporuča se pripremiti svježi pufer 10x i razrijediti ga neposredno prije upotrebe. To osigurava da pufer održava svoju učinkovitost, što dovodi do pouzdanijih rezultata elektroforeze.
Beijing Liuyi Biotechnology proizvodi za gel elektroforezu
Pažljivim kontroliranjem volumena uzorka, napona i vremena elektroforeze, možete značajno poboljšati točnost i ponovljivost svojih rezultata gel elektroforeze. Primjena ovih najboljih praksi u vašem laboratorijskom radu pomoći će vam da postignete jasnije i jasnije trake, što će dovesti do boljih podataka za daljnju analizu.
Ako imate više dobrih metoda za optimizaciju eksperimenta gel elektroforeze, dobrodošli da razgovarate s nama!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) specijalizirana je za proizvodnju instrumenata za elektroforezu više od 50 godina s vlastitim profesionalnim tehničkim timom i centrom za istraživanje i razvoj. Imamo pouzdanu i cjelovitu proizvodnu liniju od projektiranja do pregleda, skladišta, kao i marketinšku podršku. Naši glavni proizvodi su ćelija za elektroforezu (spremnik/komora), napajanje za elektroforezu, plavi LED transiluminator, UV transiluminator, gel slika i sustav za analizu itd. Također isporučujemo laboratorijske instrumente kao što su PCR instrument, vorteks mikser i centrifuga za laboratorij.
Ako imate bilo kakav plan za kupnju naših proizvoda, slobodno nas kontaktirajte. Možete nam poslati poruku na email[e-mail zaštićen]ili[e-mail zaštićen], ili nas nazovite na +86 15810650221 ili dodajte Whatsapp +86 15810650221, ili Wechat: 15810650221.
Skenirajte QR kod za dodavanje na Whatsapp ili WeChat.
Vrijeme objave: 20. kolovoza 2024