Prošlog smo tjedna podijelili nekoliko razmatranja o korištenju elektroforeze celulozno-acetatne membrane, a danas ćemo završiti ovu temu za vašu referencu.
Odabir od Koncentracija pufera
Koncentracija pufera koja se koristi u elektroforezi membrane celuloznog acetata općenito je niža od one koja se koristi u elektroforezi na papiru. Uobičajeno korišten pH 8,6BArbitalni pufer se tipično bira unutar raspona od 0,05 mol/L do 0,09 mol/L. Prilikom odabira koncentracije vrši se preliminarno određivanje. Na primjer, ako je duljina membranske trake između elektroda u komori za elektroforezu 8-10 cm, potreban je napon od 25 V po centimetru duljine membrane, a jakost struje treba biti 0,4-0,5 mA po centimetru širine membrane. Ako se te vrijednosti ne postignu ili premaše tijekom elektroforeze, koncentraciju pufera treba povećati ili razrijediti.
Pretjerano niska koncentracija pufera rezultirat će brzim pomicanjem vrpci i povećanjem širine vrpce. S druge strane, pretjerano visoka koncentracija pufera usporit će migraciju trake, otežavajući razlikovanje određenih traka razdvajanja.
Treba napomenuti da se u elektroforezi membrane celuloznog acetata značajan dio struje provodi kroz uzorak, što stvara znatnu količinu topline. Ponekad se odabrana koncentracija pufera može smatrati odgovarajućom. Međutim, u uvjetima povišene temperature okoliša ili pri korištenju višeg napona, isparavanje vode zbog topline može se pojačati, što rezultira pretjerano visokom koncentracijom pufera i čak uzrokuje isušivanje membrane.
Volumen uzorka
U elektroforezi membrane celuloznog acetata količinu volumena uzorka određuju različiti čimbenici, uključujući uvjete elektroforeze, svojstva samog uzorka, metode bojenja i tehnike detekcije. Kao opće načelo, što je metoda detekcije osjetljivija, to može biti manji volumen uzorka, što je povoljno za odvajanje. Ako je volumen uzorka prevelik, obrasci elektroforetskog odvajanja možda neće biti jasni, a bojenje također može biti dugotrajno. Međutim, pri kvantitativnoj analizi odvojenih obojenih vrpci korištenjem elucijskih kolorimetrijskih metoda detekcije, volumen uzorka ne smije biti premali jer može rezultirati nižim vrijednostima apsorbancije za određene komponente, što dovodi do većih pogrešaka u izračunavanju njihova sadržaja. U takvim slučajevima volumen uzorka treba odgovarajuće povećati.
Tipično, volumen uzorka koji se dodaje na svaki centimetar linije za nanošenje uzorka kreće se od 0,1 do 5 μL, što je ekvivalentno količini uzorka od 5 do 1000 μg. Na primjer, u rutinskoj analizi elektroforeze proteina u serumu, volumen uzorka koji se dodaje na svaki centimetar linije aplikacije općenito ne prelazi 1 μL, što odgovara 60 do 80 μg proteina. Međutim, kada se analiziraju lipoproteini ili glikoproteini istom metodom elektroforeze, potrebno je odgovarajuće povećati volumen uzorka.
Zaključno, najprikladniji volumen uzorka treba odabrati na temelju specifičnih uvjeta kroz niz preliminarnih eksperimenata.
Odabir otopine za bojenje
Odvojene trake u elektroforezi membrane celuloznog acetata obično se boje prije detekcije. Različite komponente uzorka zahtijevaju različite metode bojenja, a metode bojenja prikladne za elektroforezu membrane celuloznog acetata možda neće biti u potpunosti primjenjive na filter papir.
Tri su glavna načela za odabir rješenja za bojenjemembrana od celuloznog acetata. Prvo,Boje topive u vodi trebale bi imati prednost pred bojama topivim u alkoholu kako bi se izbjeglo skupljanje membrane i deformacija uzrokovana otopinom za bojenje potonjih. Nakon bojenja važno je membranu isprati vodom i minimalizirati trajanje bojenja. Inače bi se membrana mogla uviti ili skupiti, što bi utjecalo na kasniju detekciju.
Drugo, poželjno je odabrati boje s jakim afinitetom bojenja za uzorak. U elektroforezi serumskih proteina s membranom celuloznog acetata, aminocrno 10B se obično koristi zbog svog snažnog afiniteta za bojenje za različite komponente serumskih proteina i njegove stabilnosti.
Treće, treba odabrati pouzdane kvalitetne boje. Neke boje, iako imaju isti naziv, mogu sadržavati nečistoće koje rezultiraju posebno tamnom pozadinom nakon bojenja. Ovo čak može zamutiti izvorno dobro odvojene trake, čineći ih teško razlučitim.
Na kraju, važan je izbor koncentracije otopine za bojenje. Teoretski, moglo bi se činiti da bi veća koncentracija otopine za bojenje dovela do temeljitijeg bojenja komponenti uzorka i boljih rezultata bojenja. Međutim, nije tako. Afinitet vezanja između komponenti uzorka i boje ima određenu granicu, koja se ne povećava s porastom koncentracije otopine za bojenje. Naprotiv, pretjerano visoka koncentracija otopine za bojenje ne samo da rasipa boju, već i otežava postizanje jasne pozadine. Štoviše, kada intenzitet boje dosegne određenu maksimalnu vrijednost, krivulja apsorbancije boje ne slijedi linearni odnos, posebno u kvantitativnim mjerenjima. U elektroforezi membrane celuloznog acetata, koncentracija otopine za bojenje općenito je niža od one koja se koristi u elektroforezi papira.
Pojedinosti koje treba znati o Beijing Liuyi Biotechnology's membrana od celuloznog acetataspremnik za elektroforezu i njegovu primjenu za elektroforezu, posjetite ovdje:
lEksperiment za odvajanje proteina iz seruma celulozno-acetatnom membranom
lCelulozno-acetatna membranska elektroforeza
Ako imate bilo kakav plan za kupnju naših proizvoda, slobodno nas kontaktirajte. Možete nam poslati poruku na email[e-mail zaštićen]ili[e-mail zaštićen], ili nas nazovite na +86 15810650221 ili dodajte Whatsapp +86 15810650221, ili Wechat: 15810650221.
Referenca:Elektroforeza (drugo izdanje) gospodina Lija
Vrijeme objave: 6. lipnja 2023