Kometni test: osjetljiva tehnika za otkrivanje oštećenja i popravka DNK

Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) osjetljiva je i brza tehnika koja se primarno koristi za otkrivanje oštećenja i popravka DNA u pojedinačnim stanicama. Naziv "Comet Assay" dolazi od karakterističnog oblika kometa koji se pojavljuje u rezultatima: jezgra stanice tvori "glavu", dok oštećeni fragmenti DNK migriraju, stvarajući "rep" nalik kometu.

Načelo

Princip Comet Assay-a temelji se na migraciji fragmenata DNA u električnom polju. Intaktna DNK ostaje unutar stanične jezgre, dok oštećena ili fragmentirana DNK migrira prema anodi, tvoreći "rep" kometa. Duljina i intenzitet repa izravno su proporcionalni stupnju oštećenja DNA.

Postupak

1. Priprema stanica: Stanice koje se testiraju pomiješaju se s agarozom niske točke taljenja i rašire na stakalce mikroskopa kako bi se formirao jednoličan sloj.
2. Liza stanica: Stakalca su uronjena u otopinu za lizu kako bi se uklonila stanična membrana i nuklearna membrana, izlažući DNK.
3. elektroforeza: Stakalca se stavljaju u komoru za elektroforezu pod alkalnim ili neutralnim uvjetima. Oštećeni fragmenti DNA pod utjecajem električnog polja migriraju prema pozitivnoj elektrodi.
4. Bojenje: Nakon elektroforeze stakalca se boje fluorescentnom bojom (npr. etidijevim bromidom) kako bi se vizualizirala DNK.
5. Mikroskopska analiza: Pomoću fluorescentnog mikroskopa ili specijaliziranog softvera analiziraju se oblici kometa i mjere se parametri poput duljine repa i intenziteta.

Slika iz biorendera

Analiza podataka

Rezultati Comet testa procjenjuju se na temelju nekoliko ključnih parametara:

• Duljina repa: Predstavlja udaljenost koju DNK migrira, ukazujući na opseg oštećenja DNK.
• Sadržaj DNK repa: Postotak DNK koja migrira u rep, često se koristi kao kvantitativna mjera oštećenja DNK.
• Olive Tail Moment (OTM): Kombinira duljinu repa i sadržaj DNK u repu kako bi pružio sveobuhvatniju mjeru oštećenja DNK.

Prijave

1. Studije genotoksičnosti: Comet Assay naširoko se koristi za procjenu učinaka kemikalija, lijekova i zračenja na staničnu DNA, što ga čini ključnim alatom za ispitivanje genotoksičnosti.
2. Toksikologija okoliša: Pomaže u analizi utjecaja zagađivača okoliša na DNK organizama, pružajući uvid u sigurnost ekosustava.
3. Medicinska i klinička istraživanja: Comet Assay koristi se u proučavanju mehanizama popravka DNK, raka i drugih bolesti povezanih s DNK. Također procjenjuje utjecaj terapija raka poput radioterapije i kemoterapije na DNK.
4. Znanosti o hrani i poljoprivredi: Koristi se za procjenu sigurnosti pesticida, prehrambenih aditiva i drugih tvari te za proučavanje njihovih toksičnih učinaka na životinjskim modelima.

Prednosti

• Visoka osjetljivost: Sposoban detektirati niske razine oštećenja DNK.
• Jednostavan rad: Tehnika je jednostavna, što je čini prikladnom za probir visoke propusnosti.
• Široka primjena: Može se primijeniti na različite vrste stanica, uključujući životinjske i biljne stanice.
• Izazovi kvantifikacije: Iako pruža kvalitativne podatke o oštećenju DNK, kvantitativna analiza se uvelike oslanja na softver i tehnike analize slika.
• Eksperimentalni uvjeti: Na rezultate mogu utjecati čimbenici poput vremena elektroforeze i pH, što zahtijeva pažljivu kontrolu eksperimentalnih uvjeta.

Ograničenja

Comet Assay je neprocjenjiv alat u biomedicinskim istraživanjima, znanostima o okolišu i razvoju lijekova zbog svoje fleksibilnosti i visoke osjetljivosti u otkrivanju oštećenja i popravka DNK. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)nudi horizontalnu komoru za elektroforezu za analizu kometa. Dobrodošli u kontakt s nama kako bismo razgovarali oIspitivanje kometaprotokol.

Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) specijalizirana je za proizvodnju instrumenata za elektroforezu više od 50 godina s vlastitim profesionalnim tehničkim timom i centrom za istraživanje i razvoj. Imamo pouzdanu i cjelovitu proizvodnu liniju od projektiranja do pregleda, skladišta, kao i marketinšku podršku. Naši glavni proizvodi su ćelija za elektroforezu (spremnik/komora), napajanje za elektroforezu, plavi LED transiluminator, UV transiluminator, gel slika i sustav za analizu itd. Također isporučujemo laboratorijske instrumente kao što su PCR instrument, vorteks mikser i centrifuga za laboratorij.

Ako imate bilo kakav plan za kupnju naših proizvoda, slobodno nas kontaktirajte. Možete nam poslati poruku na email[e-mail zaštićen]ili[e-mail zaštićen], ili nas nazovite na +86 15810650221 ili dodajte Whatsapp +86 15810650221, ili Wechat: 15810650221.

Skenirajte QR kod za dodavanje na Whatsapp ili WeChat.