Što je elektroforeza u poliakrilamidnom gelu?

Elektroforeza u poliakrilamidnom gelu

Gel elektroforeza temeljna je tehnika u laboratorijima u svim biološkim disciplinama, koja omogućuje odvajanje makromolekula kao što su DNA, RNA i proteini. Različiti mediji i mehanizmi za odvajanje omogućuju učinkovitije odvajanje podskupova ovih molekula iskorištavanjem njihovih fizičkih karakteristika. Posebno za proteine, elektroforeza u poliakrilamidnom gelu (PAGE) često je tehnika izbora.

PAGE je tehnika koja razdvaja makromolekule poput proteina na temelju njihove elektroforetske mobilnosti, odnosno sposobnosti analita da se kreću prema elektrodi suprotnog naboja. U PAGE, to je određeno nabojem, veličinom (molekulskom težinom) i oblikom molekule. Analiti se kreću kroz pore formirane u poliakrilamidnom gelu. Za razliku od DNA i RNA, proteini se razlikuju u naboju prema ugrađenim aminokiselinama, što može utjecati na njihov rad. Nizovi aminokiselina također mogu formirati sekundarne strukture koje utječu na njihovu prividnu veličinu i posljedično tome kako se mogu kretati kroz pore. Stoga ponekad može biti poželjno denaturirati proteine ​​prije elektroforeze kako bi se linearizirali ako je potrebna točnija procjena veličine.

STRANICA SDS-a

Elektroforeza u poliakrilamidnom gelu s natrijevim dodecil sulfatom je tehnika koja se koristi za odvajanje proteinskih molekula mase od 5 do 250 kDa. Proteini se odvajaju isključivo na temelju njihove molekularne težine. Natrijev dodecil sulfat, anionski surfaktant, dodaje se u pripremi gelova koji maskira intrinzične naboje uzoraka proteina i daje im sličan omjer naboja i mase. Jednostavnim riječima, denaturira proteine ​​i daje im negativan naboj.

Izvorna STRANICA

Nativni PAGE je tehnika koja koristi nedenaturirane gelove za odvajanje proteina. Za razliku od SDS PAGE, u pripremi gelova ne dodaje se sredstvo za denaturaciju. Kao rezultat toga, odvajanje proteina odvija se na temelju naboja i veličine proteina. U ovoj tehnici, konformacija, presavijanje i lanci aminokiselina proteina su čimbenici o kojima ovisi odvajanje. Proteini se u ovom procesu ne oštećuju i mogu se povratiti nakon završetka odvajanja.

Kako radi elektroforeza u poliakrilamidnom gelu (PAGE)?

Osnovno načelo PAGE je odvajanje analita propuštanjem kroz pore poliakrilamidnog gela pomoću električne struje. Da bi se to postiglo, mješavina akrilamida i bisakrilamida je polimerizirana (poliakrilamid) dodatkom amonijevog persulfata (APS). Reakcija, koju katalizira tetrametiletilendiamin (TEMED), tvori mrežastu strukturu s porama kroz koje se analiti mogu kretati (Slika 2). Što je veći postotak ukupnog akrilamida uključenog u gel, to su manje pore, a time i manji proteini koji će moći proći kroz njih. Omjer akrilamida i bisakrilamida također će utjecati na veličinu pora, ali to se često održava konstantnim. Manje veličine pora također smanjuju brzinu kojom se mali proteini mogu kretati kroz gel, poboljšavajući njihovu rezoluciju i sprječavajući njihovo brzo otjecanje u međuspremnik kada se dovede struja.

Oprema za elektroforezu u poliakrilamidnom gelu

Ćelija za gel elektroforezu (spremnik/komora)
Spremnik gela za elektroforezu u poliakrilamidnom gelu (PAGE) razlikuje se od spremnika gela agaroze. Spremnik s agaroznim gelom je vodoravan, dok je spremnik PAGE okomit. Pomoću ćelije za vertikalnu elektroforezu (spremnik/komora), tanki gel (obično 1,0 mm ili 1,5 mm) se izlije između dvije staklene ploče i montira tako da je dno gela uronjeno u pufer u jednoj komori, a vrh je uronjen u pufer u drugoj komori. Kada se primijeni struja, mala količina pufera migrira kroz gel iz gornje komore u donju komoru. S jakim stezaljkama koje jamče da sklop ostaje u uspravnom položaju, oprema omogućuje brzo kretanje gela s ravnomjernim hlađenjem što rezultira jasnim trakama.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) proizvodi različite veličine ćelija za elektroforezu s poliakrilamidnim gelom (spremnici/komore). Modeli DYCZ-20C i DYCZ-20G su vertikalne ćelije za elektroforezu (spremnici/komore) za analizu DNA sekvenciranja. Neke od ćelija za vertikalnu elektroforezu (spremnici/komore) kompatibilne su sa sustavom za upijanje, poput modela DYCZ-24DN, DYCZ-25D i DYCZ-25E kompatibilne su s modelom sustava Western Blotting DYCZ-40D, DYCZ-40G i DYCZ-40F, koji služe za prijenos proteinske molekule iz gela u membranu. Nakon SDS-PAGE elektroforeze, Western Blotting je tehnika za otkrivanje specifičnog proteina u mješavini proteina. Možete odabrati ove sustave upijanja u skladu s eksperimentalnim zahtjevima.

Napajanje za elektroforezu
Kako biste osigurali električnu energiju za rad gela, trebat će vam napajanje za elektroforezu. U Liuyi Biotechnology nudimo niz izvora napajanja za elektroforezu za sve primjene. Model DYY-12 i DYY-12C s visokim stabilnim naponom i strujom može zadovoljiti zahtjeve visokonaponske elektroforeze. Ima funkciju postolja, mjerenja vremena, VH i primjene korak po korak. Idealni su za IEF i primjenu elektroforeze sekvenciranja DNA. Za opću primjenu elektroforeze proteina i DNA, imamo model DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 i tako dalje, koji su također popularni izvori napajanja sa ćelijama za elektroforezu (spremnici/komore). Oni se mogu koristiti za elektroforezu srednjeg i niskog napona, kao što je korištenje u školskim laboratorijima, bolničkim laboratorijima i tako dalje. Više modela za napajanje, molimo posjetite našu web stranicu.

Marka Liuyi ima više od 50 godina povijesti u Kini i tvrtka može ponuditi stabilne i visokokvalitetne proizvode diljem svijeta. Kroz godine razvoja, vrijedan je vašeg izbora!

Za više informacija o nama, kontaktirajte nas putem e-pošte[e-mail zaštićen] or [e-mail zaštićen].

Reference za Što je elektroforeza u poliakrilamidnom gelu?
1. Karen Steward PhD Elektroforeza u poliakrilamidnom gelu, kako radi, varijante tehnika i njezine primjene