Što je elektroforeza u poliakrilamidnom gelu?

Elektroforeza u poliakrilamidnom gelu

Gel elektroforeza temeljna je tehnika u laboratorijima u svim biološkim disciplinama, koja omogućuje odvajanje makromolekula kao što su DNA, RNA i proteini.Različiti mediji i mehanizmi za odvajanje omogućuju učinkovitije odvajanje podskupova ovih molekula iskorištavanjem njihovih fizičkih karakteristika.Posebno za proteine, elektroforeza u poliakrilamidnom gelu (PAGE) često je tehnika izbora.

PAGE je tehnika koja razdvaja makromolekule poput proteina na temelju njihove elektroforetske mobilnosti, odnosno sposobnosti analita da se kreću prema elektrodi suprotnog naboja.U PAGE, to je određeno nabojem, veličinom (molekulskom težinom) i oblikom molekule.Analiti se kreću kroz pore formirane u poliakrilamidnom gelu.Za razliku od DNA i RNA, proteini se razlikuju u naboju prema ugrađenim aminokiselinama, što može utjecati na njihov rad.Nizovi aminokiselina također mogu formirati sekundarne strukture koje utječu na njihovu prividnu veličinu i posljedično tome kako se mogu kretati kroz pore.Stoga ponekad može biti poželjno denaturirati proteine ​​prije elektroforeze kako bi se linearizirali ako je potrebna točnija procjena veličine.

STRANICA SDS-a

Elektroforeza u poliakrilamidnom gelu s natrijevim dodecil sulfatom je tehnika koja se koristi za odvajanje proteinskih molekula mase od 5 do 250 kDa.Proteini se odvajaju isključivo na temelju njihove molekularne težine.Natrijev dodecil sulfat, anionski surfaktant, dodaje se u pripremi gelova koji maskira intrinzične naboje uzoraka proteina i daje im sličan omjer naboja i mase.Jednostavnim riječima, denaturira proteine ​​i daje im negativan naboj.

Izvorna STRANICA

Nativni PAGE je tehnika koja koristi nedenaturirane gelove za odvajanje proteina.Za razliku od SDS PAGE, u pripremi gelova ne dodaje se sredstvo za denaturaciju.Kao rezultat toga, odvajanje proteina odvija se na temelju naboja i veličine proteina.U ovoj tehnici, konformacija, presavijanje i lanci aminokiselina proteina su čimbenici o kojima ovisi odvajanje.Proteini se u ovom procesu ne oštećuju i mogu se povratiti nakon završetka odvajanja.

Kako radi elektroforeza u poliakrilamidnom gelu (PAGE)?

Osnovno načelo PAGE je odvajanje analita propuštanjem kroz pore poliakrilamidnog gela pomoću električne struje.Da bi se to postiglo, mješavina akrilamida i bisakrilamida je polimerizirana (poliakrilamid) dodatkom amonijevog persulfata (APS).Reakcija, koju katalizira tetrametiletilendiamin (TEMED), tvori mrežastu strukturu s porama kroz koje se analiti mogu kretati (Slika 2).Što je veći postotak ukupnog akrilamida uključenog u gel, to su manje pore, a time i manji proteini koji će moći proći kroz njih.Omjer akrilamida i bisakrilamida također će utjecati na veličinu pora, ali to se često održava konstantnim.Manje veličine pora također smanjuju brzinu kojom se mali proteini mogu kretati kroz gel, poboljšavajući njihovu rezoluciju i sprječavajući njihovo brzo otjecanje u međuspremnik kada se dovede struja.

Oprema za elektroforezu u poliakrilamidnom gelu

Ćelija za gel elektroforezu (spremnik/komora)
Spremnik gela za elektroforezu u poliakrilamidnom gelu (PAGE) razlikuje se od spremnika gela agaroze.Spremnik s agaroznim gelom je vodoravan, dok je spremnik PAGE okomit.Pomoću ćelije za vertikalnu elektroforezu (spremnik/komora), tanki gel (obično 1,0 mm ili 1,5 mm) se izlije između dvije staklene ploče i montira tako da je dno gela uronjeno u pufer u jednoj komori, a vrh je uronjen u pufer u drugoj komori.Kada se primijeni struja, mala količina pufera migrira kroz gel iz gornje komore u donju komoru.S jakim stezaljkama koje jamče da sklop ostaje u uspravnom položaju, oprema omogućuje brzo kretanje gela s ravnomjernim hlađenjem što rezultira jasnim trakama.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) proizvodi niz veličina ćelija za elektroforezu s poliakrilamidnim gelom (spremnici/komore).Modeli DYCZ-20C i DYCZ-20G su vertikalne ćelije za elektroforezu (spremnici/komore) za analizu DNA sekvenciranja.Neke od ćelija za vertikalnu elektroforezu (spremnici/komore) kompatibilne su sa sustavom za upijanje, poput modela DYCZ-24DN, DYCZ-25D i DYCZ-25E kompatibilne su s modelom sustava Western Blotting DYCZ-40D, DYCZ-40G i DYCZ-40F, koji služe za prijenos proteinske molekule iz gela u membranu.Nakon SDS-PAGE elektroforeze, Western Blotting je tehnika za otkrivanje specifičnog proteina u mješavini proteina.Možete odabrati ove sustave upijanja u skladu s eksperimentalnim zahtjevima.

Napajanje za elektroforezu
Kako biste osigurali električnu energiju za rad gela, trebat će vam napajanje za elektroforezu.U Liuyi Biotechnology nudimo niz izvora napajanja za elektroforezu za sve primjene.Model DYY-12 i DYY-12C s visokim stabilnim naponom i strujom može zadovoljiti zahtjeve visokonaponske elektroforeze.Ima funkciju postolja, mjerenja vremena, VH i primjene korak po korak.Idealni su za IEF i primjenu elektroforeze sekvenciranja DNA.Za opću primjenu elektroforeze proteina i DNA, imamo model DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 i tako dalje, koji su također popularni izvori napajanja sa ćelijama za elektroforezu (spremnici/komore).Oni se mogu koristiti za elektroforezu srednjeg i niskog napona, kao što je korištenje u školskim laboratorijima, bolničkim laboratorijima i tako dalje.Više modela za napajanje, molimo posjetite našu web stranicu.

Marka Liuyi ima više od 50 godina povijesti u Kini i tvrtka može ponuditi stabilne i visokokvalitetne proizvode diljem svijeta.Kroz godine razvoja, vrijedan je vašeg izbora!

Za više informacija o nama, kontaktirajte nas putem e-pošte[e-mail zaštićen] or [e-mail zaštićen].

Reference za Što je elektroforeza u poliakrilamidnom gelu?
1. Karen Steward PhD Elektroforeza u poliakrilamidnom gelu, kako radi, varijante tehnika i njezine primjene